凈化車(chē)間沉降菌測試操作規程

1  目的

建立一個(gè)凈化車(chē)間潔凈區（室）沉降菌檢測的標準操作程序，保證潔凈區微生物檢測按規范執行。

2  范圍

公司所有潔凈區（室）的沉降菌測定和環(huán)境的驗證。

3  責任者

質(zhì)量技術(shù)部對本SOP實(shí)施負責。

4  程序

4.1  本測試方法采用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落進(jìn)行計數，以平板培養皿中的菌落數來(lái)判定潔凈環(huán)境內的活微生物數，并以此來(lái)評定潔凈區（室）的潔凈度。

4.2  所用的儀器和設備

4.2.1  高壓蒸汽滅菌器

使用時(shí)應嚴格按照“高壓蒸汽滅菌器操作規程”和說(shuō)明書(shū)操作。

4.2.2  恒溫培養箱

必須定期對培養箱的溫度計進(jìn)行檢定。

4.2.3  培養皿

采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養皿。

4.2.4  培養基

4.2.4.1  普通肉湯瓊脂培養基或其他藥典認可的培養基。

4.2.4.2  培養基的準備及滅菌

4.2.4.2.1  將Φ90mm的培養皿置于121℃濕熱滅菌20min或180℃干熱滅菌2h。

4.2.4.2.2 將培養基加熱溶化，冷至45℃時(shí)，在無(wú)菌操作要求下將培養基注入培養皿，每皿約15ml。

4.2.4.2.3  等瓊脂凝固后，將培養基平皿倒置于30℃-35℃恒溫培養箱中培養

48h，若培養基平皿上確無(wú)菌落生長(cháng)，即可供采樣用。制備好的培養基平皿宜在2℃-8℃的環(huán)境中存放。

4.3  測試步驟

4.3.1  采樣方法

將已制備好的培養皿按5.4.1.2的要求放置，打開(kāi)培養皿蓋，使培養基表面暴露0.5h，再將培養皿蓋蓋上后倒置。

4.3.2  培養

4.3.2.1  全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。

4.3.2.2  在36℃±1培養箱中培養，時(shí)間不少于48h。

4.3.2.3  每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。可每批選定3只培養皿作對照培養。

4.3.3  菌落計數

4.3.3.1  用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點(diǎn)計，然后用5-10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.3.3.2  若培養皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計數。

5 注意事項

5.1  測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。

5.2  采取一切措施防止人為對樣本的污染。

5.3  對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

5.4  由于細菌種類(lèi)繁多，差別甚大，計數時(shí)一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀(guān)察，不要漏計培養皿邊緣生長(cháng)的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

5.5  采樣前應仔細檢查每個(gè)培養皿的質(zhì)量，如發(fā)現變質(zhì)、破損或污染的應剔除。

6  測試規則

6.1  測試狀態(tài)

6.1.1  沉降菌測試前，被測試潔凈區（室）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速必須控制在規定值內。

6.1.2  沉降菌測試前，被測試潔凈區（室）已經(jīng)過(guò)消毒。

6.1.3  測試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。

6.2  測試人員

6.2.1  測試人同必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。

6.2.2  靜態(tài)測試時(shí)，室內測試人員不得多于二人。

6.3  測試時(shí)間

6.3.1  對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10min后開(kāi)始。

6.3.2  對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30min后開(kāi)始。

6.4  沉降菌計數

6.4.1  采樣點(diǎn)數目及其布置

6.4.1.1  最少采樣點(diǎn)數目

沉降法的最少采樣點(diǎn)數可按表1確定。

6.4.1.2  采樣點(diǎn)的布置

6.4.1.2.1  工作區采樣點(diǎn)的位置離地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。

6.4.1.2.2  可在關(guān)鍵設備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。

6.4.1.2.3  采樣點(diǎn)位置的詳細規則見(jiàn)附圖。

6.5  記錄

測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)。

測試報告的編寫(xiě)見(jiàn)附表。

6.6  結果

6.6.1  用計數方法得出各個(gè)培養皿的菌落數。

6.6.2平均菌落數的計算，見(jiàn)下式。

式中：M為平均菌落數

M1為1號培養皿菌落數

M2為2號培養皿菌落數

Mn為n號培養皿菌落數

n為培養皿總數。

6.7  結果評定

用平均菌落數判斷潔凈區（室）空氣中的微生物。100,000級潔凈區沉降菌(個(gè)／m2)應小于等于l0個(gè)；10000級潔凈區沉降菌(個(gè)／m2)應小于等于3個(gè)；100級潔凈區沉降菌(個(gè)／m2)應小于等于1個(gè)。

6.7.1  潔凈區(室)內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準。

6.7.2  若某潔凈區（區）內的平均菌落數超過(guò)評定標準，則必須對此區域先進(jìn)行消毒，然后重新采樣兩次，測試結果均須合格。

沉降菌測試記錄