潔凈室沉降菌檢測標準操作規程

⒈ 目的：建立沉降檢測的標準操作程序，用以規范員工的檢測操作。

⒉ 范圍：適用于公司內部生產(chǎn)潔凈區內的沉降菌檢測工作

⒊ 責任：生產(chǎn)部、生產(chǎn)車(chē)間、質(zhì)量管理部、QC檢驗室主任、檢驗員對本規程的執行負責。

⒋ 檢測依據：YY/T0188.6－1995藥品檢驗操作規程，第6部分，藥品生物測定法。

⒌ 內容：

5.1 設備：高壓消毒鍋、恒溫培養箱；

5.2 培養基及平皿制備：

5.2.1 培養皿：一般采用￠90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養皿。

5.2.2 培養基一般采用普通肉湯瓊脂培養基或其它藥典認可的培養基。

5.2.3 將培養皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘或于180℃干熱滅菌2小時(shí)。

5.2.4將培養基加熱溶化，冷至45℃時(shí)，在無(wú)菌操作要求下將培養基注入培養皿，每皿約15ml。

5.2.5 待瓊脂凝固后，將培養基平面倒置于30～35℃恒溫培養箱中培養48小時(shí)，若培養基平面上確無(wú)菌落生長(cháng)，即可供采樣用。

5.2.6 制備好的培養基平面宜在2～8℃的環(huán)境中存放。

5.3 采樣點(diǎn)：

5.3.1 采樣點(diǎn)的布置力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某局部區域過(guò)于集中，按照潔凈區的面積大小，而制定最少采樣點(diǎn)數目，在滿(mǎn)足最少測點(diǎn)數的同時(shí)，還宜滿(mǎn)足最少培養皿數。

最少采樣點(diǎn)數目

5.3.2 工作區采樣點(diǎn)的位置離地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。并在關(guān)鍵設備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。

5.3.3 測試標準

潔凈區微生物監控的靜態(tài)標準(a)如下：

潔凈區微生物監控的動(dòng)態(tài)標準(a)如下：

5.4 測試規則

5.4.1 測試狀態(tài)

5.4.1.1 沉降菌測試前,被測試潔凈室（區）的溫濕度必須達到規定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速必須控制在規定值內。

5.4.1.2 沉降菌測試前被測試潔凈室（區）已經(jīng)過(guò)消毒。

5.4.1.3 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)二種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。

靜態(tài)測試時(shí)潔凈室凈化空調系統已處于正常運行狀態(tài)。

動(dòng)態(tài)測試時(shí)潔凈室已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)。

5.4.2 測試人員

5.4.2.1 測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服.

5.4.2.2 靜態(tài)測試時(shí)，所有生產(chǎn)設備均已安裝就緒，但未運行，室內測試人員不得多于二人。

測試時(shí)間：對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開(kāi)始；對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘后開(kāi)始。

5.4.2.3 動(dòng)態(tài)測試時(shí)，所有生產(chǎn)設備按預定的工藝模式運行并有規定數量的操作人員在現場(chǎng)操作。

5.4.3 測試步驟

5.4.3.1 采樣方法:將已制備好的培養皿按采樣點(diǎn)的布置要求放置，打開(kāi)培養皿蓋，使培養皿表面暴露0.5小時(shí) ，再將培養皿蓋蓋上后倒置。

5.4.3.2 培養：全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中，在30～35℃培養，時(shí)間不少于48小時(shí)。

5.4.3.3 菌落計數：用肉眼直接計數、標記或在菌落計數器上點(diǎn)記，然后用5～10倍放大鏡檢查，有無(wú)遺漏。若培養皿上有二個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)以二個(gè)以上菌落數計數。

5.5 注意事項：

5.5.1 測試用具要做無(wú)菌處理，以確保測試的可靠性，正確性。

5.5.2 采取一切措施，防止人為對樣本的污染。

5.5.3 對培養基、培養條件及其它參數做祥細的記錄。

5.5.4 計數時(shí)一般用透射光對培養皿背面或正面仔細觀(guān)察，不要漏記培養皿邊緣生長(cháng)的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別。必要時(shí)，用顯微鏡鑒別。

5.5.5 采樣前應仔細檢驗每個(gè)培養皿的質(zhì)量,如發(fā)現變質(zhì)、破損或污染的應剔除。

5.6 結果計算：

用計數方法得出各個(gè)培養皿的菌落數，按下式計算：

          M1+M2+………+Mn

平均菌落M=————————

                   n               

式中：M--平均菌落數

M1--1號培養皿菌落數

M2--2號培養皿菌落數

Mn--n號培養皿菌落數

n--培養皿總數

5.7 結果評定：用平均菌落數判斷（區）空氣中微生物。

5.7.1 潔凈室（區）內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準。

5.7.2 若某潔凈室（區）內的平均菌落數超過(guò)評定標準，則必須對此區域先進(jìn)行消毒，然后重新采樣兩次，測試結果均須合格。

5.8 記錄：

5.8.1 測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)。記錄必須有日期和實(shí)驗員簽名，并交質(zhì)量管理科會(huì )簽。

5.8.2 記錄本應保留至最后一次記錄后的二年。

5.8.3 存檔處必須在記錄本中注明。