潔凈室浮游菌檢測標準操作規程

⒈ 目的：建立浮游菌檢測的標準操作程序，用以規范員工的檢測操作。

⒉ 范圍：適用于公司內部生產(chǎn)潔凈區內的浮游菌檢測工作

⒊ 責任：生產(chǎn)部、生產(chǎn)車(chē)間、質(zhì)量管理部、QC檢驗室主任、檢驗員對本規程的執行負責。

⒋ 檢測依據：GB/T16293—1996（醫藥工業(yè)潔凈室浮游菌的測試方法）。

⒌ 內容：

5.1 器具與材料

5.1.1 浮游菌采樣器

5.1.2 真空抽氣泵

5.1.3 培養皿

5.1.4 普通肉湯培養基

5.1.5 恒溫培養箱

5.2 測試步驟

5.2.1 測試前，儀器、培養皿表面必須嚴格消毒。

5.2.1.1 采樣品在進(jìn)入被測前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器宜一直放在被 測房間內。

5.2.1.2 用消毒劑擦凈培養皿的外表面。

5.2.1.3 采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉盤(pán)以及罩子的內外面，采樣結束，于用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤(pán)。

5.2.1.4 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的及外壁及內壁進(jìn)行消毒時(shí)，應將管中的殘留液倒掉并晾干。

5.2.1.5 采樣者應穿戴與被測潔凈區域相應的工作服，在轉盤(pán)上放入或調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒。

5.2.2 采樣程序

5.2.2.1 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養皿，開(kāi)動(dòng)真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5分鐘，并調好流量、轉盤(pán)轉速。

5.2.2.2 關(guān)閉真空泵，放入培養皿，蓋上蓋子后調節采樣器縫隙高度。

5.2.2.3 置采樣口于采樣點(diǎn)后，依次開(kāi)啟采樣器、真空泵、轉動(dòng)定時(shí)器，根據采樣量設定采樣時(shí)間。

5.2.3 培養

全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。

在30～35℃培養箱中培養，時(shí)間不少于48小時(shí)。

每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。可每批選定3只培養皿作對照培養。

5.2.4 菌落計數

5.2.4.1 用肉眼直接計數、標記或在菌落計數器上點(diǎn)計，然后用5～10倍放大鏡檢查，看是否有遺漏。

5.2.4.2 若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計數。

5.3 注意事項

5.3.1 采樣器的采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩定的材料制造。

5.3.2 采樣管?chē)澜麧B漏，內壁應光滑。

5.3.3 采樣管的長(cháng)度應根據測點(diǎn)的高度定，盡量減少彎曲。

5.3.4 使用前應仔細檢查每個(gè)培養皿的質(zhì)量，培養基及培養皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用。

5.3.5 操作時(shí)應防止采樣管的污染和其他人為對樣本的污染。

5.3.6 對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

5.3.7 由于細菌各類(lèi)繁多，差別甚大，計數時(shí)一般用透射光于培養皿背面或下面仔細觀(guān)察，不要漏計培養皿邊緣生長(cháng)的菌落，并須注意細菌菌落或培養基沉淀物的區別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

5.4 測試規則

5.4.1 測試狀態(tài)

5.4.1.1  浮游菌測試前，被測試 （區）溫、濕度須達到規定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速必須控制在規定值內。

5.4.1.2 浮游菌測試前，被 測試潔凈室（區）已經(jīng)過(guò)消毒。

5.4.1.3 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài) 兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。

5.4.2 測試人員

5.4.2.1 測試人員必須穿戴符合環(huán)境級別的工作服。

5.4.2.2 靜態(tài)測試時(shí)，室內測試人員不得多于2人。

5.4.3 測試時(shí)間

5.4.3.1 對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開(kāi)始。

5.4.3.2 對非單向流，如10000級，及其以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘后開(kāi)始。

5.4.4 浮游菌濃度計算

5.4.4.1 采樣點(diǎn)數量及其布置

5.4.4.1.1 最少采樣點(diǎn)數目：浮游菌測試的最少采樣點(diǎn)數目分為日常監測及環(huán)境驗證兩種情況，具體情況見(jiàn)下表。

最少采樣點(diǎn)數目

5.4.4.1.2  采樣點(diǎn)的位置

5.4.4.1.2.1 對每個(gè)100級潔凈操作區域（如層流罩、層流工作臺），可在離藥物敞開(kāi)口處30cm處設測點(diǎn)。

5.4.4.1.2.2 對每個(gè)10000級潔凈工作區域（如藥物開(kāi)口工作區）可在工作面處設測點(diǎn)。

5.4.4.1.2.3  送風(fēng)口測點(diǎn)位置離開(kāi)送風(fēng)面30cm左右。

5.4.4.1.2.4 可在關(guān)鍵設備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測點(diǎn)。

5.4.4.2 最小采樣量

采樣量根據日常檢測及環(huán)境驗證定，每次最小采樣量見(jiàn)下表。

最小采樣量

5.4.4.3 采樣次數：每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次。

5.4.5 采樣注意事項

5.4.5.1 對于單向流功送風(fēng)口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上。

5.4.5.2 布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應離開(kāi)塵粒較集中的回風(fēng)口1m以上。

5.4.5.3 采樣時(shí)，測試人員應站在采樣口的下風(fēng)側。

5.5  記錄：對測試情況進(jìn)行記錄（房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)等）。

5.6  結果計算

用計數方法得出各個(gè)培養皿的菌落數。

每個(gè)測點(diǎn)的浮游菌平均濃度的計算見(jiàn)下式。

                        菌落數

平均濃度（個(gè)ㄍm3）= —————

                        采樣量