PCR實(shí)驗室建設是一項非常復雜的系統工程，很多朋友都在網(wǎng)絡(luò )上試圖尋找一些詳細點(diǎn)的相關(guān)資料，可是非常難找到專(zhuān)業(yè)和詳細的文檔，今天我們就破例分享一下如此專(zhuān)業(yè)和詳細的PCR實(shí)驗室建設規劃方案給大家:
       PCR實(shí)驗室的核心問(wèn)題是如何避免污染，本工程實(shí)例從ＰＣＲ實(shí)驗室環(huán)境安全角度闡述如何避免污染。ＰＣＲ實(shí)驗室需獨立區域設置，避免與外界環(huán)境的交叉污染，從工藝平面布局、凈化區域劃分、人物流走向和壓力壓差控制等方面綜合闡述實(shí)驗室環(huán)境安全控制措施。

　　PCR是聚合酶鏈式反應（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）的簡(jiǎn)稱(chēng)，是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的ＤＮＡ片段，可看作生物體外的特殊ＤＮＡ復制。PCR技術(shù)的問(wèn)世成了生物學(xué)界的一個(gè)熱點(diǎn)，特別在分子生物學(xué)和人類(lèi)遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域。PCR作為一項“革命性的新技術(shù)”不僅推動(dòng)分子生物學(xué)及相關(guān)學(xué)科的發(fā)展，而且為相應的產(chǎn)業(yè)提供一片“天空”，在食品、醫學(xué)、以及其他方面的應用都具有重要的作用。由于PCR技術(shù)的高度敏感性，ＰＣＲ技術(shù)要求髙、影響因素多，從樣品制備到結果的產(chǎn)生，任何一處細微的失誤均會(huì )造成結果的偏差，導致樣品的假陽(yáng)性和假陰性結果。因此PCR實(shí)驗室的核心問(wèn)題是如何避免污染，本文結合工程實(shí)例主要從ＰＣＲ實(shí)驗室環(huán)境安全角度闡述如何避免污染。

　　1.執行標準

         以下的PCR實(shí)驗室相關(guān)標準都是我們在做實(shí)驗室建設的時(shí)候必須要遵從的執行標準，而這些標準大家是可以免費在網(wǎng)絡(luò )上查詢(xún)到的，后續我們也會(huì )幫大家逐步收集整理起來(lái)，我們也有類(lèi)似的一個(gè)相關(guān)標準的集合頁(yè)面:實(shí)驗室設計規范與標準

　　《實(shí)驗室生物安全通用要求》國家標準ＧＢ１９４８９－２００８

　　《臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室工作規范》衛醫發(fā)［２００２］８號文

　　《臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室管理暫行辦法》衛醫發(fā)［２００２］１０號文

　　《臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室設置標準》衛醫發(fā)［２００２］１０號文附件

　　《基因檢驗實(shí)驗室技術(shù)要求》國家質(zhì)監檢驗總局ＳＮ／Ｔ１１９３－２００３

　　《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境－生物污染控制》國際標準ＩＳＯ１４６９８

　　《潔凈廠(chǎng)房設計規范》國家標準ＧＢ５００７３－２０１３

　　《潔凈室施工及驗收規范》ＧＢ５０５９１－２０１０

　　《室內空氣質(zhì)量標準》國家標準ＧＢ/T1８８３－２００２

　　《生物安全實(shí)驗室建筑技術(shù)規范》國家標準ＧＢ５０３４６－２０１１

　　《病原微生物實(shí)驗室生物安全管理條例》衛生部（２００４－１１－12）

　　2.實(shí)驗室布局

　　在PCR實(shí)驗室研究過(guò)程中，很多操作都會(huì )產(chǎn)生氣溶膠，比如離心、混勻等操作。為保證環(huán)境安全，ＰＣＲ實(shí)驗室設計建造需獨立區域設置，避免與其余環(huán)境的交叉混雜，下面根據工程實(shí)例從平面布局、凈化區域劃分，人物流設置和壓力壓差控制等方面具體介紹。

　　2.1.平面功能劃分

　　根據PCR實(shí)驗室按工藝需求及相關(guān)規定劃分為６間，分別是１試劑準備區、２標本制備區、３擴增反應一區、４純化區、5擴增反應二區、６后純化區，布局見(jiàn)圖１。按國家衛生部的要求，各實(shí)驗區域必須是相互獨立的，不能直通，每個(gè)獨立實(shí)驗區設有專(zhuān)門(mén)的閘間供工作人員換工作服和鞋，進(jìn)入各工作區域必須嚴格遵循單一方向順序，即只能從左邊試劑準備區，標本制備區，擴增反應一區，純化區，擴增反應二區到后純化區，避免發(fā)生交叉污染。平面布局滿(mǎn)足《臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室工作規范》衛醫發(fā)［２００２］８號文、《臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室管理暫行辦法》衛醫發(fā)［２００２］１０號文及附件《臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室設置標準》等相關(guān)實(shí)驗室設置標準的要求。



　　2.2.凈化區域劃分

　　為避免樣本間的交叉污染，房間采取凈化控制，總體設置為１０萬(wàn)級。閘間設置為正壓區，保證與外界環(huán)境隔離，避免從鄰近區域進(jìn)入本區域的氣溶膠污染。詳見(jiàn)圖２。

　　2.3.人流物流設置

　　人流物流設置各行其道，避免交叉混雜，整個(gè)區域設置一個(gè)公用走廊，工作區域之間設置試劑物品傳遞專(zhuān)用窗，做到人物分流。

　　物流：在試劑準備區與標本制備區、標本制備區與ＰＣＲ擴增區之間，以及擴增區域和純化區之間設置有電子連鎖不銹鋼傳遞窗，以單向進(jìn)行試劑、標本等物品傳送，制的試劑通過(guò)單向傳遞窗由試劑準備區傳遞到標本制備區，處理過(guò)的標本通過(guò)單向傳遞窗由標本制備區傳遞到ＰＣＲ擴增區，按照工藝流程逐次傳遞，避免返流。單向物品傳送系統既保障了標本試劑不受污染，又保障了標本試劑不污染環(huán)境。

　　人流：人員通過(guò)閘間分別進(jìn)入各自實(shí)驗區域，進(jìn)出各實(shí)驗區域需要在閘間區域更換潔凈工作服，手消毒等。詳見(jiàn)圖３。

　2.4.壓力壓差設置

　　PCR實(shí)驗室應設置為負壓潔凈室，通過(guò)壓差控制，使整個(gè)ＰＣＲ實(shí)驗過(guò)程中試劑和標本免受氣溶膠的污染，并且降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。各個(gè)實(shí)驗室與非潔凈區之間的閘間保持正壓，＞１０Ｐａ，實(shí)驗與閘間之間的氣流組織方向為：試劑準備區空氣流向閘間，標本制備區流向閘間，而PCR擴增區氣流方向由閘間流向PCR擴增區，純化區同理；同時(shí)按照試劑單向流方向，各個(gè)實(shí)驗室之間設置不同壓力梯度來(lái)實(shí)現單向氣流組織方向，由試劑準備區、標本制備區、擴增反應一區、純化區、擴增反應二區、到后純化區壓力逐漸降低，形成單向負壓壓力梯度依次為：＋２０Ｐａ、＋１５Ｐａ、－５Ｐａ、－１０Ｐａ、－２０Ｐａ、－２５Ｐａ。詳見(jiàn)圖４。