無(wú)菌室浮游菌測試操作規程

1  范圍：

    本標準規定了醫藥工業(yè)無(wú)菌室和潔凈區中浮游菌的測試條件和測試方法。

    本標準適用于醫藥工業(yè)無(wú)菌室和潔凈區，無(wú)菌室或局部空氣凈化區域（包括潔凈工作臺）的浮游菌的測試和環(huán)境的驗證。

2  引用標準：GB/T 16293.2010

    藥品生產(chǎn)管理規范（1998修訂）附錄。

3  標準

4  測試方法

4.1  方法提要

本標本采用的方法是計數濃度法。即通過(guò)收集懸游在空氣中的生物性粒子于專(zhuān)門(mén)的培養基（選擇能證實(shí)其能夠支持微生物生長(cháng)的培養基），經(jīng)若干時(shí)間和適宜的生長(cháng)條件下讓其繁殖到可見(jiàn)菌落計數，以判定該潔室的微生物濃度。

4.2人員的職責及培訓

無(wú)菌室的測試人員應進(jìn)行本專(zhuān)業(yè)的培訓并獲得相應的資格后才能才能履行對無(wú)菌室測試的職責，其中包含涉及的衛生知識和基本的微生物知識。

無(wú)菌室的測試人員應選擇與生產(chǎn)操作的空氣潔凈度級別要求相適應的穿戴方式，外面的衣服不能帶進(jìn)100000級以上的區域。

4.3  儀器、輔助設備和培養基

選擇合適的浮游菌采樣器，包括采用無(wú)油的抽氣泵，較低的氣流流速和較大的采樣流量，以保證培養基表面的水分布被吹干。

本測試需要具備儀器、輔助設備和培養基如下：

a) 浮游菌采樣器；

b) 培養皿；

c) 高壓消毒鍋；

d) 培養基；

e) 恒溫培養箱；  

4.4  浮游菌采樣器原理

浮游菌采樣器一般采用撞擊法機理，可分為夾縫式采樣器、離心式或針孔式采樣器。夾縫式采樣器由內部風(fēng)機將氣流吸入，通過(guò)采樣器的夾縫式平板，將采集空氣噴射并撞擊到緩慢的平板培養基表面，附著(zhù)的活微生物粒子經(jīng)培養后形成菌落。離心式采樣器由于內部風(fēng)機的高速旋轉，氣流從才樣器的前部進(jìn)入后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時(shí)間撞擊到專(zhuān)用的固型培養條上，附著(zhù)活的微生物粒子經(jīng)培養后形成菌落。針孔式采樣器是氣流通過(guò)一個(gè)金屬蓋吸入，蓋子上是密集的經(jīng)過(guò)機械加工的特制小孔，通過(guò)風(fēng)機將收集到的細小的空氣直接撞擊到平板培養基表面，附著(zhù)的活物微生物粒子經(jīng)培養成型后形成菌落。

4.5  測試要點(diǎn)

4.5.1  必須按照儀器的檢定周期，定期對測試儀器作檢定。應使用檢定合格，并且使用有效期內的儀器。

4.5.2  測試儀器未進(jìn)入被測區域時(shí)，若必需，則先清洗表面吧，或在相應的無(wú)菌室內準備和存放（用保護罩或其他適當地外罩保護儀器）。

4.5.3  在100級無(wú)菌室內用紙時(shí)，上面應蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100級的無(wú)菌室內不能用鉛筆的橡皮。

4.5.4  使用測試儀器時(shí)應嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作。

4.5.4.1  儀器開(kāi)機，預熱到穩定后，方可按說(shuō)明書(shū)的規定對儀器進(jìn)行校正，同時(shí)檢查采樣流量，并根據采樣量設定時(shí)間。

4.5.4.2   采樣口必須用使用便于消毒及化學(xué)性能穩定的材料制造。

4.5.4.3  采樣管?chē)澜麧B漏，內壁應光滑。

4.5.4.4   采樣管的長(cháng)度應根據測點(diǎn)的高度定，盡量減少彎曲。

4.6   培養皿

4.6.1  一般采用φ90mm×15mm規格的培養皿。可根據所選用采樣器選擇合適的培養皿。

4.6.2離心式采樣器采用專(zhuān)用的固型培養條

4.7  培養基

     大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）或沙氏培養基（SDA）或其他用戶(hù)認可并經(jīng)驗證的培養基。

4.8 恒溫培養箱

    必須定期對恒溫培養箱進(jìn)行效驗

4.9  測試步驟；

4.9.1  測試前儀器、培養皿表面必須嚴格消毒。

4.9.1.1  采樣器進(jìn)入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級無(wú)菌室的采樣器

宜預先放在被測房間內。

4.9.1.2  用消毒劑擦凈培養皿的外表面。

4.9.1.3  采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉盤(pán)以及罩子的內外面，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤(pán)。

4.9.1.4  采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的外壁及內壁進(jìn)行消毒時(shí)，應將管中的殘留液倒掉并晾干。

4.9.1.5  采樣者應穿戴與被測潔凈區域相應的工作服，在轉盤(pán)上放入或調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒或帶無(wú)菌手套操作。

4.9.1.6 采樣儀器經(jīng)消毒后先不放入培養皿，開(kāi)啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min，并檢查流量并根據采樣量調整設定時(shí)間。

4.9.1.7 關(guān)閉浮游采樣器，放入培養皿，蓋上蓋子。

4.9.1.8 置采樣口于采樣點(diǎn)后，開(kāi)啟浮游菌采樣器進(jìn)行采樣。

4.10  培養

4.10.1  全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。

4.10.2  采用大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）配制的培養經(jīng)采樣后，在30℃～35℃培養箱中培養，時(shí)間不得少于2d；采用沙氏培養基(SDA)配制的培養皿經(jīng)采樣后，在20℃～25℃培養箱中培養，時(shí)間不少于5d。

4.10.3每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。可每批選定3只培養皿作對照培養。

4.11  菌落計數

4.11.1  用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數、標記或在菌落計數器上點(diǎn)計，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.11.2  若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辯時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計數。

4.12  注意事項

4.12.1 使用前應仔細檢查每個(gè)培養皿質(zhì)量，培養基及培養皿有變質(zhì)、破損或污染的不能用使用的。

4.12.2 對培養基、培養條件及其他參數作詳細記錄。

4.12.3 由于細菌種類(lèi)繁多，差別甚大，計數時(shí)一般用透射光于培養皿面或真面仔細觀(guān)察，不要有遺漏計培養皿邊緣生長(cháng)的菌落，并須要菌菌落或培養基沉淀的物區別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

5  測試規則

5.1 測試條件

在測試之前要，要對無(wú)菌室相關(guān)參數進(jìn)行預先測試，這類(lèi)測試將會(huì )提供測試懸浮粒子的環(huán)境條件，例如：這種預先測試或可包括：

a)  溫度和相對濕度的測試。  無(wú)菌室的溫度和相對濕度應與其生產(chǎn)及工藝要求相適

應（無(wú)特殊要求時(shí)，溫度控制在18℃～26℃，相對濕度控制在45%～65%之間為宜）。同時(shí)滿(mǎn)

足測試儀器的使用范圍；

b)  室內送風(fēng)量或風(fēng)速的測試的測試，或壓差的測試；

c)  高效過(guò)濾器的泄漏測試

5.2  測試狀態(tài)

    靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種狀態(tài)均可進(jìn)行測試。

靜態(tài)測試時(shí)，室內測試人員不得多于2人

浮游菌測試前,被測定無(wú)菌室(區)由用戶(hù)決定是否需要預先消毒.

    浮游菌測試時(shí)應標明測試時(shí)所采用的狀態(tài)和室內測試人員數。

5.3  測試時(shí)間

5.3.1  在空態(tài)或靜態(tài)a測試時(shí)，對單向流無(wú)菌室而言，測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時(shí)間不少于10min后開(kāi)始。對非單向流無(wú)菌室，測試宜在凈化系統正常運行時(shí)間不少于30min后開(kāi)始。在靜態(tài)b測試時(shí)，對單向流潔凈是（區），測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現場(chǎng)并經(jīng)過(guò)10min自?xún)艉箝_(kāi)始；；對非單向無(wú)菌室，測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現場(chǎng)并經(jīng)過(guò)20min自?xún)艉箝_(kāi)始。

5.3.2  在動(dòng)態(tài)測試時(shí)，則須記錄生產(chǎn)開(kāi)始的時(shí)間以及測試時(shí)間。

5.4.浮游菌濃度的計算