1          目的

建立無(wú)菌室浮游菌測試標準操作程序，規范無(wú)菌室浮游菌的檢測。

2          范圍

適用于無(wú)菌室（包括潔凈工作臺）浮游菌的測試和環(huán)境驗證。

3          職責

QA、QC人員遵照執行。

4          內容

4.1    參考標準：GB/T 16293-2010

4.2    測試方法

本測試方法為計數濃度法，即通過(guò)收集懸浮在空氣中的生物性粒子于專(zhuān)門(mén)的培養基（選擇能證實(shí)其能夠支持微生物生長(cháng)的培養基），經(jīng)若干時(shí)間和適宜的生長(cháng)條件讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落計數，以判定該無(wú)菌室的微生物濃度。

4.3    測試儀器、輔助設備和培養基

浮游菌采樣器、培養皿（選用與儀器相適應的培養皿）、培養基、恒溫培養箱、高壓蒸汽滅菌器。

4.4    測試狀態(tài)及測試時(shí)間

4.4.1   靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種狀態(tài)均可進(jìn)行測試，靜態(tài)測試時(shí)，室內測試人員不得多于2人。

4.4.2   在靜態(tài)a測試時(shí)，單向流無(wú)菌室（區），測試在凈化空調系統正常運行時(shí)間不少于10分鐘后開(kāi)始；非單向流無(wú)菌室（區），測試在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘后開(kāi)始。在靜態(tài)b測試時(shí)，單向流無(wú)菌室（區），測試在生產(chǎn)操作人員撤離現場(chǎng)并經(jīng)過(guò)10分鐘自?xún)艉箝_(kāi)始；非單向流無(wú)菌室（區），測試在生產(chǎn)操作人員撤離現場(chǎng)并經(jīng)過(guò)20分鐘自?xún)艉箝_(kāi)始。

4.5    采樣點(diǎn)的確定

4.5.1   最少采樣點(diǎn)數目見(jiàn)表1，每次最小采樣量見(jiàn)表2。

表1 最少采樣點(diǎn)數目

表2 最小采樣量

4.5.2   采樣點(diǎn)位置布置宜力求均勻，避免采樣點(diǎn)在局部區域過(guò)于稀疏，采樣點(diǎn)按照《潔凈區環(huán)境監控管理規程》附件×××車(chē)間潔凈度監測采樣點(diǎn)布局圖的要求布置，每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次。

4.5.3   工作區采樣點(diǎn)位置離地0.8m~1.5m左右（略高于工作面），送風(fēng)口測點(diǎn)位置離開(kāi)送風(fēng)面30cm左右，可在關(guān)鍵設備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測點(diǎn)。

4.6    測試準備

4.6.1   采樣器在進(jìn)入被測區域前先清潔表面，然后用75%酒精消毒一遍或存放于被測區域內，與被測試區域一起消毒（用于A(yíng)級無(wú)菌室的采樣器必須預先放在被測房間內）。

4.6.2   A/B級區采用一次性培養皿，其它區域按無(wú)菌操作要求，在中檢室潔凈工作臺上提前制備培養備用（將滅菌后的培養基用水浴溶解，冷卻至約50-60℃，Φ90mm培養皿每個(gè)傾注約20ml培養基，Φ150mm培每個(gè)傾注約30ml培養基），培養皿加蓋后在室溫下放至凝固。自制好的培養皿在無(wú)菌室內存放不超過(guò)48小時(shí)，2~8℃保存的培養皿一般不超過(guò)1周，一次性培養皿在標注的有效期內使用，過(guò)期不得使用。

4.6.3   A/B級區使用的培養皿在區域消毒前一次性傳入，隨環(huán)境一起消毒，在消毒液取用間架子上暫存，在有效期內使用。若需臨時(shí)傳入，則必須在前一天臭氧消毒前通過(guò)C級與B級傳遞窗傳入B級區進(jìn)行臭氧消毒，第二天使用。傳入前表面也必須用75%酒精擦拭。其它區域用培養皿按物品傳入要求當天傳入使用。

4.6.4   采樣前，先用75%酒精清洗采樣器的頂蓋、轉盤(pán)以及罩子的內外面（FKC型浮游空氣塵菌采樣器用酒精清洗采樣頭）。

4.6.5   測試具體操作見(jiàn)“JYQ-Ⅱ型浮游菌采樣器標準操作程序或FKC-1型浮游空氣塵菌采樣器標準操作程序”。

4.6.6   采樣結束后，蓋上培養皿蓋子，在培養皿上標注所有信息（包括產(chǎn)品批號，放置位置等），將培養皿用適宜的方式捆扎，倒置于30~35℃恒溫培養箱中培養，培養時(shí)間不少于2天。

4.6.7   培養結束后逐個(gè)檢查培養皿，用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數、標記，然后用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計數。

4.7    測試記錄應包含以下內容

4.7.1  被測試區域名稱(chēng)、測試日期、測試依據、測試者姓名、測試儀器及測試方法的描述，測試時(shí)所采用的狀態(tài)和室內測試人員數，采樣點(diǎn)數目，測試次數、采樣流量，測試結果（包括所有統計計算資料）等。

4.7.2  若為動(dòng)態(tài)測試，還應記錄現場(chǎng)操作人員數量，現場(chǎng)設備運轉情況等。

4.8    結果計算

4.8.1   用計數方法得出各個(gè)培養皿的菌落數。

4.8.2   每個(gè)測點(diǎn)的浮游菌平均濃度計算按下式進(jìn)行

4.9    結果評定

4.9.1   每個(gè)測點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于所選定評定標準中的界限。

4.9.2   在靜態(tài)測試時(shí)，若某測點(diǎn)的浮游菌平均菌濃度超過(guò)評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結果均合格才能判為符合。

4.9.3   若有超過(guò)規定者，必須及時(shí)與生產(chǎn)部門(mén)聯(lián)系，對該區域進(jìn)行消毒或其它處理，然后重新測試至合格。

4.10 日常監控

4.10.1  浮游菌日常監控設糾偏限度和警戒限度（限度范圍及取樣頻次見(jiàn)《潔凈區環(huán)境監控管理規程》），以保證無(wú)菌室（區）的微生物濃度受到控制，定期檢測以檢查微生物負荷以及消毒劑的效力，并作傾向分析。靜態(tài)和動(dòng)態(tài)的監控都可以采用該方法。

4.10.2  對于浮游菌的取樣頻次，如果出現下列情況應考慮修改，在評估以下情況后，也應確定其他項目的檢測頻次

——連續超過(guò)糾偏限度和警戒限度；

——停工時(shí)間比預計延長(cháng)；

——關(guān)鍵區域內發(fā)現有污染存在；

——在生產(chǎn)期間，空氣凈化系統進(jìn)行任何重大的維修；

——日常操作記錄反映出傾向性的數據；

——消毒規程的改變；

——引起生物污染的事故等；

——當生產(chǎn)設備有重大維修或增加設備時(shí)；

——當無(wú)菌室（區）結構或區域分布有重大變動(dòng)時(shí)。

4.11 注意事項

4.11.1     JYQ-Ⅱ型浮游菌采樣器經(jīng)消毒后先不放入培養皿，開(kāi)啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5分鐘，檢查流量并根據采樣量調整設定采樣時(shí)間。

4.11.2     單向流無(wú)菌室（區）或送風(fēng)口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向，非單向流無(wú)菌室（區），采樣口向上。

4.11.3     測試時(shí)必須穿著(zhù)與被測區域潔凈度級別要求相適應并經(jīng)高壓滅菌后的無(wú)菌服。

4.11.4     布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應盡量避開(kāi)塵粒較集中的回風(fēng)口。

4.11.5     采樣結束，需用75%酒精噴射采樣器罩子的內壁和轉盤(pán)（FKC型浮游空氣塵菌采樣器噴射采樣頭和保護蓋）。

4.11.6     應采取一切措施防止采樣過(guò)程的污染和其他可能對樣本的污染。

4.11.7     每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染，可每批選定3只培養皿作為對照培養；培養皿在用于檢測時(shí)，為避免培養皿運輸或搬動(dòng)過(guò)程造成的影響，宜同時(shí)進(jìn)行對照試驗，每次或每個(gè)區域取1個(gè)對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養皿一起放入培養箱中培養，結果應無(wú)菌落生長(cháng)。

4.11.8     采樣前應仔細檢查每個(gè)培養皿的質(zhì)量，如發(fā)現變質(zhì)、破損或污染的應剔除。

4.11.9     由于細菌種類(lèi)繁多，差別甚大，計數時(shí)一般用透射光于于培養皿背面或正面仔細觀(guān)察，不要漏計培養皿邊緣生長(cháng)的菌落，并須注意細菌菌落或培養基沉淀物的區別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

4.11.10  必須定期對恒溫培養箱進(jìn)行校驗。

5          相關(guān)文件

6          附件

無(wú)

7          變更歷史